Indice

Prefazione	p.8

I Parte – Alimenti	p.9
1.1 Preparazione e semina campioni	p.10
1.2 Schemi di diagnostica batteriologica 	p.14
1.2.1 Prove di sterilità metodo - (Numero più probabile Metodo MPN/g o mL)	p15
1.2.2 Carica batterica mesofila (UNI EN ISO 4833:2004)	p.16
1.2.3 Ricerca coliformi metodo MPN (UNI EN ISO 4831)	p.17
1.2.4 Ricerca coliformi (UNI EN ISO 4832:2006)	p.18
1.2.5 Ricerca enterobacteriaceae (UNI EN ISO 21258-2:2004)	p.19
1.2.6 Ricerca di Salmonella spp (UNI EN ISO 6579:2008)	p.20
1.2.7 Ricerca di Salmonella su uova fresche (ISTISAN 96/35)	p.21
1.2.8 Ricerca di Salmonella nei molluschi (ISTISAN 96-35)	p.22
1.2.9 Ricerca Escherichia coli (UNI EN ISO 16649-2:2001)	p.23
1.2.10 Ricerca Yersinia enterocolitica (ISTISAN 96-35)	p.24
1.2.11 Listeria monocytogenes (negli alimenti escluso latte e derivati) (ISTISAN 96-35)	p.25
1.2.12 Listeria monocytogenes (nel latte e derivati) (ISTISAN 96-35)	p.26
1.2.13 Numerazione di Listeria monocytogenes (ISTISAN 96-35)	p.27
1.2.14 Listeria monocytogenes (UNI EN ISO 11290-1:2005)	p.28
1.2.15 Listeria monocytogenes (metodo per la conta) (UNI EN ISO 11290-2:2005)	p.29
1.2.16 Ricerca del Vibrio cholerae (ISTISAN 96-35)	p.30
1.2.17 Ricerca del Vibrio parahaemolyticus (ISTISAN 96-35) 	p.31
1.2.18 Ricerca Campylobacter termoresistente (ISTISAN 96-35)	p.32
1.2.19 Metodo orizzontale per la conta di Bacillus cereus presunto (UNI EN ISO 7932:2005)	p.33
1.2.20 Numerazione Bacillus cereus (ISTISAN 96-35)	p.34
1.2.21 Ricerca di Clostridium botulinum e sue tossine (Tipo A B E ) (ISTISAN 96-35)	p.35
1.2.22 Ricerca delle spore di Clostridium botulinum e identificazione (ISTISAN 96-35)	p.36
1.2.23 Conta di batteri solfito riduttori negli alimenti (ISO 15213:2003)	p.37
1.2.24 Numerazione Clostridium perfringens (ISTISAN 96-35)	p.38
1.2.25 Metodo orizzontale per la conta di Stafilococchi coagulasi positivi 
(S. aureus e altre specie) (UNI EN ISO 6888-1:2004)	p.39
1.2.26 Staphylococcus aureus (ISTISAN 96-35)	p.40
1.2.27 Stapyilococcus aureus (Tecnica MPN) (ISTISAN 96-35)	p.41
1.2.28 Conta Pseudomonas spp carne e prodotti a base di carne (ISO 13720:2010)	p 42
1.2.29 Conta Pseudomonas spp in latte e derivati (ISO/TS 11059:2009)	p 43
1.2.30 Conta batteri lattici mesofili negli alimenti (ISO 15214:1998)	p 44
1.2.31 Ricerca lieviti e muffe (ISTISAN 96-35)	p.45
1.2.32 Conta lieviti e muffe in alimenti con aw >0.95 (ISO 21527-1:2008)	p 46
1.2.33 Conta lieviti e muffe in alimenti con aw ≤0.95 (ISO 21527-2:2008)	p 47
1.2.34 Filth test sfarinati e prodotti di trasformazione	p.48
1.2.35 Schema riassuntivo dei terreni colturali per ricerche microbiologiche su alimenti	p.49

II Parte - Acque 	p.52
2.1. Normativa e modalità	p.53
2.1.1 Acque potabili	p.54
2.1.2 Acque minerali	p.55
2.1.3 Schema operativo di prelievo	p.56
2.1.4 Tabella tempi massimi e accettabili raccomandati per la conservazione dei campioni dei
campioni di acque per analisi microbiologiche	p.57

2.2 Schemi di diagnostica batteriologica 	p.58
2.2.1 Ricerca Legionella spp. Campionamento e prelievo	p.59
2.2.2 Determinazione della carica batterica a 22 °C e 36 °C nelle acque (ISO 6222:1999)	p.61
2.2.3 Conteggio delle colonie su agar 22°C e 37°C (ISTISAN 07/5 Riferimento UNI EN ISO 6222:01) (Acque per il consumo umano, di piscina, acque e soluzioni di dialisi)	p.62
2.2.4 Determinazione dei batteri coliformi a 37°C (ISS A 006A  ISTISAN 07-5) - Escherichia coli
(ISS A001A ISTISAN 07-5)	p.63
2.2.5 Coliformi totali (APAT CNR-IRSA 7010) Manuali e linee guida 29-2003) 
(Acque superficiali, di fiume, di lago,acque reflue anche sottoposte a trattamento)	p.64
2.2.6 Determinazione dei batteri coliformi a 37°C (ISS A 006B Rev.00 Rap. ISTISAN 07-5) 
(Acque per il consumo umano, di piscina, acque e soluzioni di dialisi)	p.65
2.2.7 Coliformi totali - Metodo membrane filtranti (MF) APAT CNR-IRSA 7010C - Manuali e 
linee guida 29-2003 (Acque superficiali, di fiume, di lago, acque reflue anche sottoposte
a trattamento)	p.66
2.2.8 Coliformi fecali - Metodo membrane filtranti (MF) APAT CNR-IRSA 7020B - Manuali e 
linee guida 29-2003) (Acque superficiali, di fiume, di lago, acque reflue anche sottoposte
a trattamento)	.p.67
2.2.9 Ricerca Escherichia coli (APAT CNR-IRSA7030) - Manuali e linee guida 29/2003 
(Metodi A-B-C-D-E-F) (Acque superficiali, di fiume,di lago,reflue anche trattate e 
acque con materiale in sospensione)	p.68
2.2.10 Determinazione di Escherichia coli (prova normalizzata) 
(ISTISAN 07-5 ISS A 001B Rev.00 UNI EN ISO 9308-1:2002)	p.69
2.2.11 Determinazione di Escherichia coli (prova rapida) 
(ISTISAN 07-5 ISS A 001C Rev.00 UNI EN ISO 9308-1:2002)	p.70
2.2.12 Determinazione degli enterococchi (ISTISAN 07-5 ISS A002A UNI EN ISO 7899-2:2003)	p.71
2.2.13 Streptococchi fecali ed enterococchi - Metodo membrane filtranti. 
Manuali e linee guida APAT CNR-IRSA 7040 Manuali e linee guida 29-2003 
(Acque superficiali, di fiume, di lago, acque reflue anche sottoposte a trattamento)	p.72
2.2.14 Determinazione enterobatteri patogeni: Salmonella (ISS A 011A Rev.00 ISTISAN 07-5)	p.73
2.2.15 Determinazione enterobatteri patogeni: Salmonella (ISS A 011B Rev.00 ISTISAN 07-5)	p.74
2.2.16 Determinazione enterobatteri patogeni: Salmonella (ISS A 011C Rev.00 ISTISAN 07-5)	p.75
2.2.17 Ricerca Salmonella spp su acque superficiali, di fiume, di lago, e su acque reflue sottoposte
a trattamento (APAT CNR-IRSA 7080 Manuali e linee guida 29-2003)	p.76
2.2.18 Determinazione enterobatteri patogeni : Shigella (ISS A 012A Rev 00 ISTISAN 07-5)	p.77
2.2.19 Determinazione enterobatteri patogeni : Shigella (ISS A 012B Rev 00 ISTISAN 07-5)	p.78
2.2.20 Determinazione enterobatteri patogeni :  Shigella (ISS A 012C Rev 00 ISTISAN 07-5)	p.79
2.2.21 Enterobatteri patogeni: Vibrio (ISS A 013A Rev. 00 ISTISAN 07-5)	p.80
2.2.22 Determinazione Stafilococchi patogeni (ISS A 018A Rev. 00 ISTISAN 07-5)	p.81
2.2.23 Determinazione Stafilococchi patogeni (ISS A 018B Rev. 00 ISTISAN 07-5)	p.82
2.2.24 Determinazione di Pseudomonas aeruginosa 
(ISS A 003A Rev.00 ISTISAN 07-5 UNI EN ISO 12780:2002)	p.83
2.2.25 Batteri opportunisti patogeni: Aeromonas spp (ISS A 014A Rev.00 ISTISAN 07-5)	p.84
2.2.26 Determinazione di Clostridium perfringens (ISS A 005A Rev.00 ISTISAN 07-5) solo 
su acque provenienti o contaminate da acque superficiali	p.85
2.2.27 Determinazione di Clostridium perfringens (ISS A 005B  Rev.00 ISTISAN 07-5) solo 
su acque provenienti o contaminate da acque superficiali	p.86
2.2.28 Spore di clostridi solfito riduttori (APAT CNR-IRSA 7060 Manuali e linee guida. 29-2003) 
(Acque superficiali, di fiume, di lago, acque reflue anche sottoposte a trattamento)	p.87
2.2.29 Determinazione dei funghi (Acque destinate al consumo umano, acque di piscina, acque 
trattate e soluzioni di dialisi): ISTISAN 07-5 Metodo ISS A 016A Rev00. ISTISAN 07-5 
Metodo ISS A 016B Rev 00. ISTISAN 07-5 Metodo ISS A 016C Rev.00	p.88
2.2.30 Acque minerali (DM 13.01.93 G.U. n. 14 19.01.93) (Modalità operative)	p.89
2.2.31 Schema riassuntivo dei terreni colturali per ricerche microbiologiche su acque	p.90

III Parte - Terreni di coltura - reagenti e soluzioni	p.93
3.1 Premessa terreni	p.94
3.2 Valutazione della produttività e selettività dei terreni colturali per prove microbiologiche	p.95
3.3 Terreni di coltura 	p.96

IV Parte - Indicazioni validazione metodi - stima incertezza - espressione dei risultati- tabelle…………………………………………………………………………………..	p.153
Definizioni	p.154
4.1 Validazione metodi di prova microbiologici………………………………………………………	p.160
4.1.1 Validazione metodi di prova microbiologici qualitativi	p.160
4.1.1.1 Validazione mediante confronto dei risultati ottenuti con un metodo di riferimento……………………….	p.160
4.1.1.2 Validazione mediante prove su campione a valore noto…………………………………………………….	p.160
4.1.1.3 Criteri di valutazione delle prestazioni del metodo………………………………………………………….	p.161
4.1.2 Validazione metodi di prova microbiologici quantitativi – 
Valutazione delle capacità degli operatori a eseguire prove…………………………………..	p.162
4.1.2.1 Modalità operative…………………………………………………………………………………..	p.163
4.1.2.2 Pianificazione del processo di validazione di un metodo quantitativo……………………………..	p.163
4.1.2.3 Criteri di valutazione………………………………………………………………………………..	p.168
4.1.3 Linearità (proporzionalità delle diluizioni)	p.169
4.1.3.1 Valutazione della linearità (proporzionalità delle diluizioni)…………………………………….…	p.169
4.1.4 Determinazione dei parametri sensibilità-specificità- efficienza-selettività del metodo 	p.170
4.1.4.1 Calcoli………………………………………………………………………………………………..	p.170
4.1.4.2 Valutazione dei risultati………………………………………………………………………………	p.170
4.1.5 Validazione secondaria	p.171
4.1.5.1 Metodo 1 : UNI 10674:2002…………………………………………………………………………	p.171
4.1.5.2 Metodo 2 :ISO 14461/IDF 169:2005………………………………………………………………	p.172
4.1.5.3 Metodo 3 :UNI EN ISO 4833:2004………………………………………………………………….	p.174
4.2 Incertezza del risultato analitico microbiologico	p.176
4.2.1 Incertezza (intervallo di fiducia) stimata sulla base della distribuzione di Poisson	p.176
4.2.1.1 Conteggio e stima dell’intervallo di fiducia a seguito della semina su piastra di un
campione con esecuzione di n.1 prova singola	p.176
4.2.1.2 Incertezza (intervallo di fiducia) stimata sulla base della distribuzione di Poisson
approssimata alla normale (15 – 300 UFC/piastra)	p.178
4.2.1.3 Conteggio e intervallo di fiducia con formula riportata nella ISO 7218:2007	p.178
4.2.1.4 Incertezza (intervallo di fiducia) di misura nei prodotti destinati al consumo umano e
animale e nei campioni ambientali secondo la 
ISO/TS 19036:2006 + ISO 19036:2006/Amd/1:2009……………………………………………….	p.180
4.2.1.5 Incertezza (intervallo di fiducia) di misura nelle acque secondo la ISO 8199:2008	p.182
4.3  Determinazione del valore MPN ISO 7218:2007	p.184

Tabelle	p.186
Tabella n.1 MPN (Mac Crady)	p.187
Tabella n.2 di Poisson	p.188
Tabelle n.3 e 4 intervallo di confidenza del conteggio su piastra Petri-Probabilità 95%	p.189

Bibliografia	p.190